磁珠法核酸提取在科研、基因工程、動(dòng)物醫(yī)學(xué)、植物研究、檢驗(yàn)檢疫等多個(gè)領(lǐng)域的應(yīng)用都比較廣泛,核酸提取比較注重效率以及結(jié)果的準(zhǔn)確性,尤其是在樣本量比較大的時(shí)候。造成核酸核酸提取效果不好的原因有很多,有一些是
核酸提取試劑質(zhì)量問(wèn)題,有的是因?yàn)椴僮魅藛T本身對(duì)核酸提取存在誤區(qū),操作不當(dāng)造成的。本文慧慶小編主要和大家探討一下磁珠法核酸提取的誤區(qū)有哪些。
磁珠法核酸提取的誤區(qū)有哪些
1.磁珠使用越多提取效果越好
有些操作人員認(rèn)為磁珠多加一點(diǎn),就能吸上更多的核酸,這種想法是不對(duì)的。因?yàn)榇胖楹鸵后w的比例是有一定閾值的,磁珠添加過(guò)多,將因?yàn)闊o(wú)法均勻分散于液體中,而喪失其分散的性能,洗滌過(guò)程中造成核酸磁珠和液體接觸的效率降低;磁珠過(guò)量也會(huì)吸附更多的雜質(zhì),影響除雜效果。通常情況下,磁珠法試劑盒給出的參考磁珠用量都是略微過(guò)量的,無(wú)需額外增加。
2.試劑使用越多提取效果越好
有些客戶在使用試劑盒時(shí)會(huì)認(rèn)為裂解效果不好就加裂解液,洗滌效果不好就加洗滌液,這是不對(duì)的。因?yàn)樵黾右后w體積,會(huì)減少磁珠碰撞幾率,導(dǎo)致吸附率的下降。所以很多時(shí)候,為了保持核酸提取效率,實(shí)際的使用量應(yīng)按照說(shuō)明要求并結(jié)合實(shí)際情況適量添加。
3.洗滌次數(shù)越多提取效果越好
為了使得到的核酸更加純凈,使用者會(huì)在核酸雜質(zhì)過(guò)多時(shí)增加洗滌次數(shù),洗滌次數(shù)的增加確實(shí)有利于提純核酸,但是由于每次洗滌會(huì)損失一定量的核酸并增加核酸斷裂水解的可能性,所以次數(shù)一般控制在2-4次,并不是越多越好。
4.樣本越多提取效果越好
如果樣本不新鮮或者核酸含量少,有些使用者會(huì)增加樣本量,以達(dá)到增加核酸提取量的目的,這也是常見(jiàn)磁珠法核酸提取的誤區(qū)。簡(jiǎn)單增加樣本量有時(shí)會(huì)引入過(guò)多雜質(zhì),超出裂解液裂解能力,降低提取效率。如樣本量不足,建議先經(jīng)過(guò)富集或者濃縮步驟再開(kāi)始提取。
5.好的磁珠就應(yīng)該在所有試驗(yàn)中效果都好
磁珠的種類多樣、特性千差萬(wàn)別,比如在粒徑大小、分散性、磁響應(yīng)時(shí)間、包被密度等多個(gè)方面都各有不同。所以不同磁珠所適應(yīng)的實(shí)驗(yàn)和體系也是不同的,有的在常量核酸提取中吸附效率更高、有的更適用于微量核酸提取等,一種磁珠并不能適用于所有實(shí)驗(yàn)。
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